Concentrazione Operativa (2 Primer, 2 Sonde)

Aprendo i prodotti liofilizzati:

Centrifugare brevemente prima di aprire, il pellet potrebbe essersi depositato sul tappo.

Le HybProbes sono fornite secondo le seguenti quantità

300 pmol, 1 nmol, 3 nmol, 30 nmol.

Il prodotto liofilizzato non deve essere congelato, in quanto è stabile a temperatura ambiente. Occorre tenerlo al riparo dalla luce.

Impiego con il LightCycler®

Per rilevare le sequenze varianti con il metodo delle curve di melting o per la quantificazione, occorre usare la sonda a una concentrazione finale compresa fra 0,15 e 0,20 µM, corrispondente a 3-4 pmol in 20 µl di reazione. Variazioni possono essere necessarie in fase di ottimizzazione dell'analisi.

HybProbe LC Red (5LC)/fluoresceina      

Concentrazione nella reazione   

Quantità molari nella Master Mix


per reazione

Volume per reazione

 

 

32 campioni: 640µl

10 campioni: 200µl

1 campioni: 20µl

Volume di Solozione Stock/Reazione

Primer 1

0,50 µM

320 pmol

100 pmol

10 pmol

1 µl/10 µM

Primer 2

0,50 µM

320 pmol

100 pmol

10 pmol

1 µl/10 µM

Sonda 5LC

0,15 µM

96 pmol

30 pmol

3 pmol

1 µl/3 µM

Sonda 3FL

0,15 µM

96 pmol

30 pmol

3 pmol

1 µl/3 µM

o

 

 

Probe 3FL

0,10 µM

64 pmol

20 pmol

2 pmol

0,7 µl/3 µM