Oligonucleótido

Un oligonucleótido es una secuencia corta de acido deoxyrribonucleico (ADN o del inglés DNA) o acido ribonucleico (ARN o del inglés RNA), de diez a cien bases. En la biología molecular y biotecnología tienen varias diferentes funciones:

Antisenso como bloque de la expresión génica.

Cebadores en reacciones de amplificación

Sondas de hibridación

En microarreglos

Síntesis de oligonucleótidos

TIB Molbiol utiliza el método del fosfito-triester en fase sólida con la cadena creciente del oligonucleótido anclada a un suporte sólido (CPG). La síntesis se completa mediante ciclos de reacciones que se repiten hasta que se completa la secuencia deseada. Cada ciclo esta compuesto de cuatro reacciones principales:

Desprotección: la eliminación del grupo de protección dimetoxitritilo (DMT) con un tratamiento ácido.

Acoplamiento: adición del siguiente nucleótido, en forma de ß-cianoetilfosforamidito, al grupo hidroxilo 5’ del nucleótido precedentemente de protegido.

Bloque: bloque de todos los hidroxilos que no reaccionaron en la reacción anterior mediante una acetilación.

Oxidación: Finalmente, el grupo fosfito internucleotídico se oxida a un grupo fosfato estable.

El producto final se rescata del soporte con un tratamiento de hidróxido de amonio.

El primer pasaje de purificación es una cromatografía de exclusión o filtración en gel G-50. Dependiendo del tipo de molécula solicitada el oligonucleótido viene sometido a diferentes y variables pasajes de purificación (FPLC, HPLC, precipitación con EtOH). Seguido de adecuados controles de calidad (HPLC / FPLC analítico, espetrometria de masas, fluorimetria). La cantidad del producto final se determina mediante espectrofotometría. Todos los productos se despachan en forma liofilizada.

Cebador 5 nmol

Cebadores

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