Concentrazione Operativa (2 Primer, 2 Sonde)
Aprendo i prodotti liofilizzati:
Centrifugare brevemente prima di aprire, il pellet potrebbe essersi depositato sul tappo.
Le HybProbes sono fornite secondo le seguenti quantità
300 pmol, 1 nmol, 3 nmol, 30 nmol.
Il prodotto liofilizzato non deve essere congelato, in quanto è stabile a temperatura ambiente. Occorre tenerlo al riparo dalla luce.
Impiego con il LightCycler®
Per rilevare le sequenze varianti con il metodo delle curve di melting o per la quantificazione, occorre usare la sonda a una concentrazione finale compresa fra 0,15 e 0,20 µM, corrispondente a 3-4 pmol in 20 µl di reazione. Variazioni possono essere necessarie in fase di ottimizzazione dell'analisi.
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HybProbe LC Red (5LC)/fluoresceina |
Concentrazione nella reazione |
Quantità molari nella Master Mix |
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per reazione |
Volume per reazione |
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32 campioni: 640µl |
10 campioni: 200µl |
1 campioni: 20µl |
Volume di Solozione Stock/Reazione |
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Primer 1 |
0,50 µM |
320 pmol |
100 pmol |
10 pmol |
1 µl/10 µM |
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Primer 2 |
0,50 µM |
320 pmol |
100 pmol |
10 pmol |
1 µl/10 µM |
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Sonda 5LC |
0,15 µM |
96 pmol |
30 pmol |
3 pmol |
1 µl/3 µM |
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Sonda 3FL |
0,15 µM |
96 pmol |
30 pmol |
3 pmol |
1 µl/3 µM |
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o |
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Probe 3FL |
0,10 µM |
64 pmol |
20 pmol |
2 pmol |
0,7 µl/3 µM |
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